Validation d'une technique maison pour le typage HLA-B27 npar cytométrie en flux pour le diagnostic de la spondylarthrite ankylosante

Abstract

La Spondylarthrite Ankylosante (SPA) est le chef de file d’un groupe d’affections appelés spondylarthropathies ayant plusieurs points communs et un même terrain génétique de susceptibilité représenté par l’antigène d’histocompatibilité HLA-B27. Présent dans 90% des cas, le HLA-B27 est un élément de diagnostique important dans la SPA. Plusieurs techniques sont utilisées pour la recherche de ce marqueur. Dans ce présent travail, Nous avons évalué une nouvelle technique de typage d’antigène l'HLA-B27 à savoir la cytometrie en flux (CMF). Pour cela sur 152 patients avec suspicion de SPA nous avons analysé un échantillon de sang de chaque patient via la CMF pour le phénotypage à la surface des cellules lymphocytaires de la molécule HLA-B27. Ces mêmes échantillons ont été typés pour la recherche d’allèle HLA B27 par PCR en temps réel. Au cours de cette étude, nous avons valider les résultats obtenus par la technique CMF avec les résultats obtenus par la technique RT-PCR qui est le gold standard (une référence) pour définir le statut d’un patient (sain ou malade). Par ailleurs avec les résultats obtenus nous avons déterminé une médiane de 250 pour les valeurs médianes d’intensité de fluorescence ou MFI du marqueur HLA B27 pour chaque patient. Ainsi, les résultats de la médiane des MIF des patients positifs à la présence HLA-B27 par PCR en temps réel était significativement plus élevée que celle des patients négatifs à l’absence HLA-B27 3300 vs 195. En effet, l’anticorps anti-HLAB27 utilisé dans notre test cytométrique peut donner des réactions croisées avec d’autres spécificités HLA ayant une parenté antigénique avec l’antigène HLAB27. Les patients porteurs de ces spécificités peuvent donner des MFI proches de celles des patients HLAB27 positifs. Il existe donc une zone grise dans laquelle peuvent chevaucher les MFI des « vrai » positifs (HLAB27) et celles des faux positifs. Grâce aux résultats de notre étude on a pu définir les bornes 1800 et 2500 comme valeurs médianes de fluorescence de la zone grise. La performance de notre technique a été évaluer à partir de la courbe ROC déterminant ainsi que notre phynotypage par CMF à une excellente sensibilité et spécificité pour la valeur dans le coin supérieur gauche du graphique caractériser par un point 1800 qui présente la plus faible valeur des médianes de fluorescence des échantillons connus positifs par RT-PCR ceci donc est le seuil de positivité. Enfin les résultats obtenus dans notre étude ont une parfaite discrimination entre malade et non malade.