Etude de la toxicité à faibles doses des phtalates et développement d'une méthodologie analytiques de leur dosage dans l'environnement

Abstract

Le Di (2-ethylhexyl) phtalate (DEHP) est un perturbateur endocrinien omniprésent dans l'environnement, l’évaluation de ses effets trans-générationnels à faibles doses , sur le système de reproduction chez le rat et le développement d'une méthodologie analytique alternative de son dosage dans l'eau, en se focalisant sur la maîtrise des contaminations environnementales, étaient les deux principaux objectifs de travail de cette thèse. Une étude trans-générationnelle de toxicité pour la reproduction chez le rat avec les doses de 0.5, 50 et 5000ƒÊg/kgPC/j a été réalisée dans la première partie de ce travail. Les principaux paramétrés reproductifs évalues sont: Concentration spermatique, Testostérone, Puberté, Fertilité et AGD. Une mise au point et la validation d'une méthode analytique par HPLC-UV a été réalisée dans la deuxième partie de ce travail. Conditions opératoires de la méthode HPLCUV: phase mobile constituée de 100% Acétonitrile sur une colonne C18, mode isocratique, débit 0.6ml/mn, volume d'injection 50ƒÊl, détection à 225 et 275 nm et temps d'analyse de 20mn. Optimisation des procédés de préconcentration par lyophilisation et extraction SPE, application de la méthode validée sur les eaux minérales. Les principaux résultats obtenus sont les suivant : Infertilité totale chez les rats F0 exposes pendant la période post-natale à 5000ƒÊg/kg/j. Réduction de la concentration spermatique de 46%, 24% et 41% chez F0 paternelle aux doses 5000, 50 et 0.5ƒÊg/kg PC/j, respectivement. 47% avec un cas d'azoospermie et 38% chez la descendance F1 paternelle aux doses 50 et 0.5 ƒÊg/kg PC/j, respectivement. Une courbe dose-réponse non monotonique, sous forme "U" inverse a été observé pour la testostérone de génération F0 exposées pendant la période post-natale avec une augmentation significative a 50ƒÊg/kg/j. La méthode HPLC-UV a ete validee dans le domaine de concentration entre 900-2000ƒÊg/l avec un R2 de 0.999 . Le taux de recouvrement était de 99.99% avec un RSD de 0.82%. Les LOD et LOQ étaient de 23 et 71ƒÊg/l, respectivement. Les rendements de pré-concentration ont été de 145 et 70% pour la lyophilisation et extraction SPE, respectivement. En conclusion, l’étude trans-générationnelle a démontré que les doses réglementaires ne sont pas valables pour le DEHP, et la validation analytique a montre que la méthode HPLC-UV ne peut pas s'appliquer au dosage du DEHP en traces.