Evaluation de la fonction ovarienne des femelles d'élevage par radioimmunodosage (RIA) de la progestérone à l'aide d'une trousse locale et commerciale

Abstract

Ce projet de thèse s'inscrit dans le cadre du développement d'une trousse radio immunologique (RIA) en phase solide, de dosage direct et fiable de la progestérone dans le lait bovin. Son objectif est la préparation et la caractérisation des trois (03) réactifs de base qui composent la trousse, à savoir i) le traceur (analogue à la progestérone: progestérone 11ƒµ Hemisuccinate, marque à Iode 125), ii) la phase solide (anticorps spécifique à la progestérone et le traceur) et iii) la gamme étalon progestérone, dans le but d'obtenir un système sensible, reproductible et spécifique pour le dosage de la progestérone. Le traceur est préparé par marquage indirect a la Chloramine T et purifie sur colonne gel Sephadex G-25. L'évaluation du traceur progestérone 11ƒµ HS-monoiodohistamine obtenu a montre une performance très satisfaisante d'un point vue rendement de marquage de l'histamine (71%), pureté radiochimique (98%), taux de liaisons spécifiques (40%) et non spécifiques (3%) et stabilité dans le temps (3 mois). Quant aux résultats d'activité volumique (9ƒµCi/ml) et spécifique (7ƒµCi/ƒµg), ils sont tributaires de l'activité de marquage (357ƒµCi). Le système de séparation phase solide préparé avec un anticorps commercial a montre une meilleure séparation des formes libres et liées compare aux systèmes de séparations par précipitation (charbon/Dextran et PEG/Bƒ µglobuline) et une conservation des propriétés immunologiques pendant une durée de 12 mois. Une gamme d'étalons progestérone (0-40 ng/ml) a été préparée dans une matrice tampon phosphate, puis calibrée, lyophilisée et stockée au réfrigérateur. Pour le besoin du dosage, ces étalons sont reconstitues dans la matrice lait déplété. Sur le plan stabilité, ces étalons stockés au réfrigérateur pendant une durée de trois (03) années, enregistrent un taux de dégradation de 10% de la concentration initiale. Une fois la trousse est constituée, l'optimisation des conditions de dosage, a portée sur la durée et la température d'incubation de la réaction d'immuno-compétition et le nombre de lavage des tubes de dosage après décantation. Quant a la validation de la trousse, elle a été évaluée d'abord sur un plan analytique, a travers l'estimation du test de précision (variations intra et inter- essais de trois échantillons de lait bovin), les coefficients de variation enregistres sont respectivement de l'ordre de 13% et 12% pour les basses concentrations et varient entre 5% et 9% pour les concentrations de progestérone moyennes et élevées. Le test d'exactitude révélé par le test de dilution et le test de surcharge enregistrent des pourcentages de recouvrement qui s'échelonnent respectivement entre 86.9% et 126% et entre 83.8% et 118.5%. Sur le plan clinique, la comparaison par analyse de régression des résultats de dosage de la progestérone, d'un lot (30) d'échantillons de lait collecte sur des vaches à différents stades physiologiques, doses simultanément avec la trousse locale et la trousse commerciale Immunotech montrent une très bonne corrélation (r= 0.998) entre les deux trousses.