Optimisation du protocole d’extraction différentielle de l’ADN à partir d’échantillons prélevés de cas d’agressions sexuelles.

Abstract

Cette étude a comme objectif d’optimiser une méthode efficace pour isoler l'ADN de sperme à partir d'un échantillon de fluide contenant des cellules épithéliales vaginales. Ce type d’extraction différentielle de l’ADN spermatique et de l’ADN épithélial est appliqué à des échantillons prélevés de cas d’agressions sexuelles.

L’échantillon étudié est une tache mixte préparée à partir d’un mélange de deux échantillons : des cellules épithéliales buccales prélevées par écouvillon (frottis jugal) et du sperme afin d’approcher un mélange semblable à celui des frottis vaginaux post-coïtaux après l’acte de l’agression sexuelle.

La méthode classique d’extraction différentielle de l’ADN utilisée à l’INCC est considérée comme inefficace suite aux expériences réalisées dans cette étude.

Une méthode modifiée d'extraction différentielle de la procédure, réalisée en deux étapes, a été jugée convenable pour séparer l'ADN des spermatozoïdes et l'ADN des cellules épithéliales vaginales des taches mixtes.

En première étape de digestion, les cellules épithéliales buccales des taches mixtes ont été lysées avec la protéinase K et le SDS et les têtes des spermatozoïdes restants dans la solution lysée ont été recueillies par centrifugation.

En deuxième étape de digestion, les têtes des spermatozoïdes ont été lysées avec un tampon contenant la protéinase K, le SDS et le DTT en tant qu’agent réducteur. Les fractions d'ADN extraites des deux solutions de lyse ont été enrichies, l'une avec de l'ADN de spermatozoïdes et l'autre avec de l'ADN de cellules épithéliales.

Un examen cytologique a été réalisé pour la mise en évidence des spermatozoïdes et a montré une absence totale de spermatozoïdes par la méthode d’extraction usuelle. Il a donc fallu mettre au point un tampon modifié, contenant les mêmes composants mais à des concentrations différentes, il a été suivi d’un lavage pour aboutir à l’obtention d’un nombre significatif de spermatozoïdes, suffisamment élevé pour l’extraction d’une quantité d’ADN appréciable ayant permis de poursuivre les opérations de PCR, d’électrophorèse capillaire puis d’établir des profils génétiques attendus.