optimisation des techniques d'extraction d'ADN de leishmania a partir des organes lymphoides de la souris BALB/C en vue d'une PCR en temps reel.

Abstract

Les leishmanioses sont des maladies parasitaires touchant l’homme et les animaux dont certains sont des réservoirs. Elles sont en passe de devenir un problème de santé majeur. Au cours de ces vingt dernières années, de très nombreux procédés d'extraction des acides nucléiques ont été décrits, et des kits sont actuellement proposés par un certain nombre d'industriels. Le présent travail à pour principal objectif d'optimiser trois différentes techniques d'extractions , deux méthodes classiques ( phénol-chloroforme et relargage salin) et une méthode de kit, et de donner au biologiste les principaux éléments nécessaires au choix de la technique d'extraction d’ADN à partir d'un échantillon tissulaires la plus adaptée à son laboratoire. On peut conclure que chacune de ces méthodes fait gagner l’opérateur sur certains détails. En effet, l’utilisation des kits permet de gagner en termes de pureté et de temps, alors que le point fort des méthodes classiques est sans doute leur coût largement inferieure à celui des kits. Quelle que soit la méthode d'extraction et de purification d’ADN utilisée, nous avons obtenu de l'ADN en qualité et en quantité suffisantes pour réaliser des actes de biologie moléculaire tels que la PCR en temps réel.