Application de la cytogénétique conventionnelle et moléculaire (Caryotype et FISH) dans la leucémie myéloïde chronique

Abstract

Résumé

La leucémie myéloïde chronique (LMC) est une hémopathie maligne chronique caractérisée par une prolifération importante de la lignée myéloïde sans blocage de maturation et par la présence d’un marqueur cytogénétique typique : le chromosome Philadelphie résultant de la translocation réciproque entre les deux bras longs des chromosomes 9(q34) et 22(q11) mettant en contact un oncogène (Abl) et le gène Bcr créant un gène de fusion Bcr-Abl qui est traduit en une protéine fonctionnelle à activité tyrosine kinase élevée directement responsable de la transformation leucémique .

Nous avons réalisé au laboratoire d’hématologie EHS ELCC Blida la mise en culture de cellules médullaires (pendant 24h) avec synchronisation, réalisation d’un choc hypotonique, fixation du culot cellulaire, étalement pour établir le caryotype en bandes R pour la mise en évidence du chromosome Philadelphie. Un autre étalement est réalisé simultanément pour l’examen de cytogénétique moléculaire (FISH) ; techniques d’hybridation in situ reposent sur la capacité des fragments d’ADN marqués par un ou plusieurs fluorochromes (sondes) de s’hybrider spécifiquement avec un ADN complémentaire. Les hybrides non spécifiques sont éliminées par lavage, les hybrides spécifiques sont révélés par immunofluorescence mettent ainsi en évidence les gènes hybrides Bcr-Abl. En dernier on a la biologie moléculaire quantitative PCR ultra (entièrement automatisé) qui est l’examen de référence pour l’évaluation de la réponse au traitement.

Pour la prise en charge d’une hyperleucocytose majeure à 153000/µl associer à une splénomégalie et une myélémie à 45% le diagnostic de la LMC en phase chronique est confirmé par des examens cytogénétiques (caryotype et FISH) le patient est mis sous inhibiteurs de tyrosine kinase de première génération (Imatinib 400mg/J). En évaluation de la réponse selon les critères de l’ELN à 3, 6 et 12 mois le patient était toujours en rémission hématologique et cytogénétique complète ainsi en réponse moléculaire majeure (RMM) à 0.024% en biologie moléculaire, cette réponse optimale illustre bien l’efficacité du traitement.