Mise au point d’une QRT PCR (RV1, RV2) pour le diagnostic de la Leishmaniose

Abstract

Ce travail s’inscrit dans une démarche d’optimisation du diagnostic de la leishmaniose à travers le développement d’une qRT-PCR utilisant les amorces RV1/RV2 ciblant le kADN de Leishmania sp. Une étude a été menée sur un échantillon de 30 patients suspects, recrutés à l’Hôpital Central de l’Armée (HCA), combinant plusieurs techniques de diagnostic : les méthodes classiques (examen direct, culture), sérologiques (ELISA, Western blot) et moléculaires (PCR classique, RT-PCR par kit commercial, qRT-PCR avec SYBR Green). L’examen direct a permis de détecter la présence de formes amastigotes dans 25% des cas, tandis que la culture sur milieux NNN n’a pas permis d’obtenir des résultats concluants en raison de contaminations fréquentes. Les tests sérologiques ont montré une sensibilité variable, avec un taux de positivité de 14% pour l’ELISA et de 29 % pour le Western blot. Les résultats moléculaires ont révélé une nette supériorité des techniques en temps réel : la RT-PCR réalisée avec le kit Sacace Biotechnologies et la qRT-PCR utilisant SYBR Green ont détecté l’ADN parasitaire dans 43.33% des échantillons. Les courbes sigmoïdes franchissant nettement le seuil de fluorescence ont confirmé la présence du kADN de Leishmania. En revanche, la PCR classique n’a permis la détection que dans 23.33% des cas. Ces résultats montrent une parfaite corrélation entre les deux méthodes de RT-PCR, avec une sensibilité de 100 % chez les cas confirmés, contre des performances moindres pour la PCR classique. La qRT-PCR avec SYBR Green constitue ainsi une méthode rapide, sensible et adaptée aux laboratoires à ressources limitées pour le diagnostic de routine de la leishmaniose