Résumé:
Afin de régénérer à partir des protoplastes de cals de trois cultivars du palmier dattier (Deglet Nour, Akerbouch et Degla Beïda), différentes étapes sont nécessaires: Isolement, purification et culture. Chaque étape doit être optimisée. Pour ce faire, l’étude a montré que les meilleures conditions pour:
- L’isolement de protoplastes viables sont: une solution enzymatique contenant 1,5% de Cellulase et 1% de Macérozyme en plus de 0,5 M ou 0,6 M de Mannitol avec une incubation pendant 16 à 18 h sous conditions stationnaires ou 50 rpm d’agitation selon le cultivar. Les résultats obtenus ainsi sont de 4,67 x 105, 4,92 x 105 et 4,17 x 105 protoplastes / gmf respectivement pour Deglet Nour, Akerbouch et Degla Beïda.
- La purification se fait sur une couche de saccharose concentrée à 25% pour Deglet Nour et Degla Beïda, et sur une couche de saccharose à 21% pour Akerbouch. La centrifugation est faite pour les trois cultivars à 65 x g pendant 5 minutes. Les résultats en terme de pourcentage de récupération de protoplastes viables purifiés ainsi sont: 85%, 87% et 95% respectivement pour Deglet Nour, Akerbouch et Degla Beïda.
- La culture des protoplastes ainsi isolés a été réalisée sur un milieu semi-solide contenant 0,3% d’agarose contenant 0,5 ; 1 ou 2 mg/l de 2,4-D combinées respectivement avec 1, 0,5 et 0,5 mg/l de BAP. Une balance hormonale (BH Nº 1) contenant 2 mg/l de 2,4-D et 0,5 mg/l de BAP a permis un bon maintien de la viabilité des protoplastes cultivés (46,4 et 20% après 15 jours de la mise en culture respectivement pour Deglet Nour et Akerbouch) avec une bonne régénération de la paroi (43,6 et 18%) et division cellulaire (17,5 et 2,8%) aboutissant après plus de deux mois de culture à des microcals visibles à l’œil nu composés d’un grand nombre de cellules.
